Q1. 細(xì)胞如何貼壁或者固定好長效機製？

這是第一步應用擴展，也是基礎(chǔ)和關(guān)鍵的一步保護好，這是基礎(chǔ)全面展示，基礎(chǔ)不好確定性，后面一切都是白搭。

對于貼壁細(xì)胞: 先將潔凈的爬片片在 70%乙醇中進(jìn)行浸泡處理集成應用，然后用干凈無菌的鑷子放置到培養(yǎng)皿中使命責任，用無菌 PBS 洗去殘留的乙醇。待細(xì)胞接近長成單層后取出蓋玻片(一般都是過夜培養(yǎng))操作小心滿意度，防止細(xì)胞脫片。

對于懸浮細(xì)胞: 如果能像貼壁細(xì)胞一樣可持續，那就好了主要抓手。傳統(tǒng)這是一個痛點(diǎn)待解決，其實(shí)新的方法就是使用靶點(diǎn)科技（Biotarget）的懸浮細(xì)胞免疫熒光專用玻片構建。讓懸浮細(xì)胞簡單四步創新科技，就能像貼壁細(xì)胞一樣固定好，主要是共創輝煌，細(xì)胞還是活的具有重要意義，還可以刺激。

Q2. 如何避免多種染色互串強大的功能？

*細(xì)胞不能鋪的太密，細(xì)胞稀釋一下解決方案，濃度不能太高優勢，盡可能用大體積來鋪細(xì)胞。太密就導(dǎo)致一抗結(jié)合蛋白增多增產，更容易出現(xiàn)非特異性染色便利性，且細(xì)胞太密，顯微鏡拍照出來的效果就會很一般行動力，一般6孔板滿孔的貼壁細(xì)胞提供有力支撐，取1/8的量鋪到帶有爬片的12孔板里，大概12小時后保供，細(xì)胞密度就剛剛好自行開發。懸浮細(xì)胞，直接用靶點(diǎn)科技的懸浮細(xì)胞免疫熒光專用玻片就行責任。雙抗體染色時可不用活細(xì)胞染核液（Hoechst）品質，也就是不要最開始染核利用好，放到最后封片時，用DAPI染解決問題，DAPI濃度不要過高系列，核很容易被染色，低濃度染色即可相互配合。

*支原體清除后再做IF統籌推進。用狀態(tài)好，未被污染的細(xì)胞去做IF關鍵技術，狀態(tài)好的細(xì)胞伸展很開了解情況，染色效果也更好，若細(xì)胞支原體污染技術研究，可能會產(chǎn)生背景臟重要的，圖像不完整等現(xiàn)象，非特異性染色嚴(yán)重且去不掉姿勢，染核染抗體都會被染上亂七八糟的東西相互融合。

*一抗?jié)舛鹊膯栴}。雙抗體染色若外轉(zhuǎn)質(zhì)粒綠色化，可染標(biāo)簽抗體不同需求，標(biāo)簽抗體更特異且使用濃度低，一般都在1：500左右保持穩定；若染內(nèi)源性蛋白總之，濃度可1：200，做之前記得看下抗體說明書該抗體是否可以做IF支撐作用；4度過夜染效果更好研學體驗，一抗可回收，負(fù)20保存最為突出，大概可用3次近年來，根據(jù)抗體靈敏度決定使用次數(shù)；雙抗體IF發展目標奮鬥，一定要用不同來源的的抗體技術先進，一個用鼠，一個用兔延伸，最好不要雙鼠或者雙兔的認為。

*二抗：常溫孵育1～2h，避光新趨勢，避開同屬性的二抗反應能力，洗滌一抗可用pbs，洗滌二抗可以用tbst學習，多加一些吐溫結構重塑。吐溫可以洗滌掉非特異結(jié)合的抗體聽得懂，多洗幾次。

*拍攝：封片后拍攝時大大縮短，可以適當(dāng)縮短激發(fā)光波長要落實好，使其沒有交叉波長。比較好的選擇：綠光488更默契了，紅光555先進技術。重合的波譜，就會不單純激發(fā)不合理波動。拍出來就不單純宣講手段。