Q1. 細胞如何貼壁或者固定好研究與應用？

這是第一步穩中求進，也是基礎(chǔ)和關(guān)鍵的一步資源優勢，這是基礎(chǔ)指導，基礎(chǔ)不好搶抓機遇，后面一切都是白搭。

對于貼壁細胞: 先將潔凈的爬片片在 70%乙醇中進行浸泡處理高質量，然后用干凈無菌的鑷子放置到培養(yǎng)皿中提供了有力支撐，用無菌 PBS 洗去殘留的乙醇。待細胞接近長成單層后取出蓋玻片(一般都是過夜培養(yǎng))操作小心前景，防止細胞脫片進一步意見。

對于懸浮細胞: 如果能像貼壁細胞一樣，那就好了共享應用。傳統(tǒng)這是一個痛點待解決生產能力，其實新的方法就是使用靶點科技（Biotarget）的懸浮細胞免疫熒光專用玻片。讓懸浮細胞簡單四步示範推廣，就能像貼壁細胞一樣固定好堅持好，主要是，細胞還是活的大幅增加，還可以刺激特性。

Q2. 如何避免多種染色互串？

*細胞不能鋪的太密建言直達，細胞稀釋一下多種，濃度不能太高，盡可能用大體積來鋪細胞充分發揮。太密就導(dǎo)致一抗結(jié)合蛋白增多發展成就，更容易出現(xiàn)非特異性染色，且細胞太密重要方式，顯微鏡拍照出來的效果就會很一般開展面對面，一般6孔板滿孔的貼壁細胞，取1/8的量鋪到帶有爬片的12孔板里模式，大概12小時后自動化，細胞密度就剛剛好提升。懸浮細胞高品質，直接用靶點科技的懸浮細胞免疫熒光專用玻片就行。雙抗體染色時可不用活細胞染核液（Hoechst）意料之外，也就是不要最開始染核文化價值，放到最后封片時，用DAPI染置之不顧，DAPI濃度不要過高不斷完善，核很容易被染色，低濃度染色即可方便。

*支原體清除后再做IF基礎上。用狀態(tài)好，未被污染的細胞去做IF應用領域，狀態(tài)好的細胞伸展很開保持競爭優勢，染色效果也更好，若細胞支原體污染發展機遇，可能會產(chǎn)生背景臟長效機製，圖像不完整等現(xiàn)象，非特異性染色嚴重且去不掉全技術方案，染核染抗體都會被染上亂七八糟的東西分享。

*一抗?jié)舛鹊膯栴}。雙抗體染色若外轉(zhuǎn)質(zhì)粒信息化，可染標簽抗體方式之一，標簽抗體更特異且使用濃度低，一般都在1：500左右新型儲能；若染內(nèi)源性蛋白競爭力所在，濃度可1：200引人註目，做之前記得看下抗體說明書該抗體是否可以做IF；4度過夜染效果更好溝通機製，一抗可回收好宣講，負20保存，大概可用3次領先水平，根據(jù)抗體靈敏度決定使用次數(shù)；雙抗體IF，一定要用不同來源的的抗體戰略布局，一個用鼠事關全面，一個用兔，最好不要雙鼠或者雙兔的狀態。

*二抗：常溫孵育1～2h等形式，避光，避開同屬性的二抗研究與應用，洗滌一抗可用pbs飛躍，洗滌二抗可以用tbst，多加一些吐溫全面協議。吐溫可以洗滌掉非特異結(jié)合的抗體重要部署，多洗幾次。

*拍攝：封片后拍攝時工具，可以適當縮短激發(fā)光波長智慧與合力，使其沒有交叉波長。比較好的選擇：綠光488重要的角色，紅光555開放要求。重合的波譜，就會不單純激發(fā)平臺建設。拍出來就不單純服務機製。