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RetroBeads™逆向示蹤熒光微粒是Lumafluor 公司特色的逆向示蹤產(chǎn)品，且是目前文獻(xiàn)證實有效的示蹤微粒（該產(chǎn)品的有效性經(jīng)數(shù)百篇從無脊椎動物到哺乳動物實驗的研究論文證實）戰略布局，  該示蹤產(chǎn)品體內(nèi)注射高度集中不易擴(kuò)散積極回應，信號強(qiáng)的特性，對活細(xì)胞或活體無毒面向，且存留時間大于一年製度保障，與大多順向示蹤劑、原位雜交檢測技術(shù)性能、免疫組化技術(shù)兼容拓展基地。

Lumafluor 綠色 Green RetroBeads操作說明

一、包裝與稀釋：

  Lumafluor 的beads包裝于一支密封的小管內(nèi)培訓，內(nèi)含的濃縮beads懸浮于蒸餾水中不合理波動。如使用紅色Beads作為神經(jīng)通路的逆向示蹤，其稀釋方法推薦采用：大鼠視皮層內(nèi)可采用1：4比例進(jìn)行稀釋而不減少Beads的熒光標(biāo)記強(qiáng)度和質(zhì)量重要工具。然而對于實驗我們不推薦使用稀釋的Beads而使用原液進(jìn)行注射示蹤積極拓展新的領域。除蒸餾水外，常規(guī)的鹽溶液如NaCl更優質、KCl溶液也可作為稀釋液相對開放。如使用綠色Beads，則強(qiáng)烈建議使用原液脫穎而出，無需稀釋拓展應用。

二、溫度儲存:

   為避免蒸發(fā)結構，Bead溶液應(yīng)存放于冰箱內(nèi)4度冷藏管理，切忌勿冷凍！ 冷凍的Beads將失去效用能力建設，無法使用模樣。而變干的beads同樣也無法使用（無法重懸），該產(chǎn)品建議一年內(nèi)用完服務。

三很重要、注射：

   Beads使用壓力注射，如1 mlHamilton微量注射器或氣壓注射系統(tǒng)覆蓋，如需小區(qū)域微量注射(30-50 nl)異常狀況，可采用末端30-50 um直徑的玻璃電極注射，而常規(guī)的逆向示蹤（注射量0.1-0.3 ul）可使用更大直徑的玻璃電極高效。盡管如此應用創新，即使注入更大的劑量，Beads機構，也不會明顯從注射位點擴(kuò)散（通常擴(kuò)散距離少于1mm）的特性，因此，為盡量充分標(biāo)記投射到一個較大神經(jīng)核團(tuán)的神經(jīng)元攜手共進，需使用多點注射。盡管Beads帶有負(fù)電荷推進一步，但是不建議采用離子滲透法注入示蹤Beads經過。

四、存活時間：

   在大多數(shù)恒溫脊椎動物系統(tǒng)中，檢測Beads的時間推薦為1周管理。目前并未檢測Beads的zui長可檢測期設計，然而在Beads的熒光強(qiáng)度和質(zhì)量至少可保持在體內(nèi)14個月以上不變，而細(xì)胞可能會被yongjiu標(biāo)記改進措施。目前并未發(fā)現(xiàn)Beads在動物或神經(jīng)元中表現(xiàn)出毒性作用的報道就此掀開。

五、固定和處理：

   準(zhǔn)的固定方法是：0.1 M PBS沖洗或灌注后在4%的多聚甲醛（0.1 M PBS配制今年，pH 7.4）中固定穩步前行，用戊二醛固定會產(chǎn)生大量的組織自發(fā)熒光，妨礙Beads標(biāo)記的神經(jīng)元動手能力，并且綠色Beads在戊二醛固定的組織中將根本觀察不到逐步改善，因此應(yīng)盡量避免采用。如采用冰凍切片提升，切片應(yīng)用PBS漂洗后用明膠包被的載玻片貼片晾干大大提高，在充分風(fēng)干后，再用二甲苯透明1分鐘研究成果，然后用熒光封片劑（Fluoromount或Krystalon）封片取得了一定進展。Fluoromount可從Atomergic Chemetals Corp., （Farmingdale, NY）公司購買; Krystalon可從Harleco (EM Industries，Gibbstown, NJ）購買（靶點科技有售）大面積。切片只可短期暴露在乙醇或二甲苯中積極參與，但是長時間暴露（大于5分鐘）會損壞Beads。Beads 對甘油非常敏感搖籃，在甘油環(huán)境中熒光會迅速萃滅技術，因此切忌使用甘油類封片劑，如無法避免推動，還可采用水楊酸甲酯代替甘油作為封片劑相對較高。封片后的切片如存放于黑暗環(huán)境中，熒光Beads標(biāo)記的細(xì)胞可保持一年不萃滅（但是切片的自身熒光背景會增加）信息。迄今為止相關，還沒有成功采用塑膠材料包被Beads標(biāo)記的組織的記錄。

六豐富內涵、成像觀察:

   紅色Beads中的染料為羅丹明生產效率，因此所有與羅丹明匹配的熒光濾鏡均可使用，部分老的尼康公司的羅丹明濾鏡因背景較高適應性，可能導(dǎo)致無法觀察到熒光Beads將進一步，通常Zeiss 和Leitz的標(biāo)準(zhǔn)羅丹明濾鏡可獲得較好的觀察效果。而大多綠色熒光濾鏡均可較好地觀察綠色Beads的熒光結(jié)果發展成就，設(shè)置為熒光黃的濾鏡可獲得較強(qiáng)的明亮熒光成就，但是同時也帶來較高的背景干擾重要方式。較寬波段的熒光濾鏡比窄波段的熒光濾鏡可以獲得更強(qiáng)的熒光信號。在長時間的觀察和拍照下Beads的熒光也不會淬滅系統。

 在低倍數(shù)或低數(shù)值孔徑物鏡下(如 X4, X10)通常難以觀察到Bads的熒光信號非常重要，只有細(xì)胞被顯著標(biāo)記，X10的油鏡（數(shù)值孔徑大于0.4）或者更大倍數(shù)的物鏡才可觀察到空間廣闊。通常情況下營造一處，X 25的油鏡可以清晰地觀察到低倍鏡下無法觀察到的標(biāo)記細(xì)胞。物鏡的選用對綠色熒光Beads尤其重要知識和技能。在做出實驗失敗的決定前（在目標(biāo)區(qū)域無法觀察到標(biāo)記細(xì)胞）取得顯著成效，可先用油鏡仔細(xì)觀察注射位點附近的細(xì)胞是否被標(biāo)記，此處應(yīng)該觀察到大量的標(biāo)記細(xì)胞特征更加明顯。

  對使用綠色熒光Beads標(biāo)記的額外提醒：目前已發(fā)現(xiàn)綠色熒光Beads在年青動物比年老動物中標(biāo)記更為理想的情況估算，此外，年青動物的組織自發(fā)熒光（背景）也更低的可能性，因此不要畏懼，假如可以的話，在使用綠色熒光Beads做逆向標(biāo)記實驗時請盡量使用年輕動物問題。

  因為綠色熒光Beads的激發(fā)光段比紅色熒光Beads短逐漸顯現，因此組織自發(fā)熒光是個問題，因此系統穩定性，應(yīng)采用減少自發(fā)熒光的步驟以獲得更理想的實驗結(jié)果拓展基地，這些方法有：（1）使用更薄的切片，如30微米比40或50微米理想實力增強；（2）使用年青的動物體系流動性；（3）封片后立即觀察拍照（隨著時間增加背景也會增加）。

七帶來全新智能、參考文獻(xiàn)（詳詢靶點科技）:

1.Katz, L.C., Burkhalter, A., and Dreyer, W.D. Fluorescent latex microspheres as a retrograde neuronal marker for in vivo and in vitro studies of visual cortex. Nature 310: 498-500 (1984).

2.Katz, L.C. and Iarovici, D.M. Green fluorescent latex microspheres: a new retrograde tracer. Neuroscience 34: 511-520 (1990).