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RetroBeads™逆向示蹤熒光微粒是Lumafluor 公司特色的逆向示蹤產(chǎn)品，且是目前文獻證實有效的示蹤微粒（該產(chǎn)品的有效性經(jīng)數(shù)百篇從無脊椎動物到哺乳動物實驗的研究論文證實）資料，  該示蹤產(chǎn)品體內(nèi)注射高度集中不易擴散提高，信號強合規意識，對活細胞或活體無毒引領作用，且存留時間大于一年深刻內涵，與大多順向示蹤劑又進了一步、原位雜交檢測技術(shù)多種場景、免疫組化技術(shù)兼容。

Lumafluor 綠色 Green RetroBeads操作說明

一規劃、包裝與稀釋：

  Lumafluor 的beads包裝于一支密封的小管內(nèi)擴大公共數據，內(nèi)含的濃縮beads懸浮于蒸餾水中。如使用紅色Beads作為神經(jīng)通路的逆向示蹤帶動擴大，其稀釋方法推薦采用：大鼠視皮層內(nèi)可采用1：4比例進行稀釋而不減少Beads的熒光標記強度和質(zhì)量核心技術體系。然而對于實驗我們不推薦使用稀釋的Beads而使用原液進行注射示蹤。除蒸餾水外持續發展，常規(guī)的鹽溶液如NaCl必然趨勢、KCl溶液也可作為稀釋液。如使用綠色Beads擴大，則強烈建議使用原液發展的關鍵，無需稀釋道路。

二、溫度儲存:

   為避免蒸發(fā)真諦所在，Bead溶液應存放于冰箱內(nèi)4度冷藏指導，切忌勿冷凍！ 冷凍的Beads將失去效用充分，無法使用進一步完善。而變干的beads同樣也無法使用（無法重懸），該產(chǎn)品建議一年內(nèi)用完優化服務策略。

三關規定、注射：

   Beads使用壓力注射，如1 mlHamilton微量注射器或氣壓注射系統(tǒng)兩個角度入手，如需小區(qū)域微量注射(30-50 nl)建強保護，可采用末端30-50 um直徑的玻璃電極注射，而常規(guī)的逆向示蹤（注射量0.1-0.3 ul）可使用更大直徑的玻璃電極生產效率。盡管如此使命責任，即使注入更大的劑量，Beads使用，也不會明顯從注射位點擴散（通常擴散距離少于1mm）合規意識，因此，為盡量充分標記投射到一個較大神經(jīng)核團的神經(jīng)元有效性，需使用多點注射創新內容。盡管Beads帶有負電荷，但是不建議采用離子滲透法注入示蹤Beads廣泛關註。

四善於監督、存活時間：

   在大多數(shù)恒溫脊椎動物系統(tǒng)中，檢測Beads的時間推薦為1周就能壓製。目前并未檢測Beads的zui長可檢測期更合理，然而在Beads的熒光強度和質(zhì)量至少可保持在體內(nèi)14個月以上不變，而細胞可能會被yongjiu標記更優美。目前并未發(fā)現(xiàn)Beads在動物或神經(jīng)元中表現(xiàn)出毒性作用的報道各方面。

五、固定和處理：

   準的固定方法是：0.1 M PBS沖洗或灌注后在4%的多聚甲醛（0.1 M PBS配制成效與經驗，pH 7.4）中固定適應性，用戊二醛固定會產(chǎn)生大量的組織自發(fā)熒光，妨礙Beads標記的神經(jīng)元便利性，并且綠色Beads在戊二醛固定的組織中將根本觀察不到重要的作用，因此應盡量避免采用。如采用冰凍切片，切片應用PBS漂洗后用明膠包被的載玻片貼片晾干穩中求進，在充分風干后，再用二甲苯透明1分鐘最深厚的底氣，然后用熒光封片劑（Fluoromount或Krystalon）封片協同控製。Fluoromount可從Atomergic Chemetals Corp., （Farmingdale, NY）公司購買; Krystalon可從Harleco (EM Industries，Gibbstown, NJ）購買（靶點科技有售）品質。切片只可短期暴露在乙醇或二甲苯中利用好，但是長時間暴露（大于5分鐘）會損壞Beads。Beads 對甘油非常敏感解決問題，在甘油環(huán)境中熒光會迅速萃滅系列，因此切忌使用甘油類封片劑，如無法避免相互配合，還可采用水楊酸甲酯代替甘油作為封片劑慢體驗。封片后的切片如存放于黑暗環(huán)境中，熒光Beads標記的細胞可保持一年不萃滅（但是切片的自身熒光背景會增加）智能化。迄今為止科技實力，還沒有成功采用塑膠材料包被Beads標記的組織的記錄。

六建設、成像觀察:

   紅色Beads中的染料為羅丹明在此基礎上，因此所有與羅丹明匹配的熒光濾鏡均可使用，部分老的尼康公司的羅丹明濾鏡因背景較高前來體驗，可能導致無法觀察到熒光Beads自主研發，通常Zeiss 和Leitz的標準羅丹明濾鏡可獲得較好的觀察效果。而大多綠色熒光濾鏡均可較好地觀察綠色Beads的熒光結(jié)果更加廣闊，設置為熒光黃的濾鏡可獲得較強的明亮熒光損耗，但是同時也帶來較高的背景干擾。較寬波段的熒光濾鏡比窄波段的熒光濾鏡可以獲得更強的熒光信號不斷發展。在長時間的觀察和拍照下Beads的熒光也不會淬滅積極影響。

 在低倍數(shù)或低數(shù)值孔徑物鏡下(如 X4, X10)通常難以觀察到Bads的熒光信號，只有細胞被顯著標記緊密協作，X10的油鏡（數(shù)值孔徑大于0.4）或者更大倍數(shù)的物鏡才可觀察到越來越重要。通常情況下，X 25的油鏡可以清晰地觀察到低倍鏡下無法觀察到的標記細胞規模。物鏡的選用對綠色熒光Beads尤其重要近年來。在做出實驗失敗的決定前（在目標區(qū)域無法觀察到標記細胞），可先用油鏡仔細觀察注射位點附近的細胞是否被標記發展目標奮鬥，此處應該觀察到大量的標記細胞技術先進。

  對使用綠色熒光Beads標記的額外提醒：目前已發(fā)現(xiàn)綠色熒光Beads在年青動物比年老動物中標記更為理想的情況，此外，年青動物的組織自發(fā)熒光（背景）也更低認為，因此服務好，假如可以的話，在使用綠色熒光Beads做逆向標記實驗時請盡量使用年輕動物反應能力。

  因為綠色熒光Beads的激發(fā)光段比紅色熒光Beads短共謀發展，因此組織自發(fā)熒光是個問題，因此結構重塑，應采用減少自發(fā)熒光的步驟以獲得更理想的實驗結(jié)果聽得懂，這些方法有：（1）使用更薄的切片，如30微米比40或50微米理想高質量發展；（2）使用年青的動物全方位；（3）封片后立即觀察拍照（隨著時間增加背景也會增加）。

七影響力範圍、參考文獻（詳詢靶點科技）:

1.Katz, L.C., Burkhalter, A., and Dreyer, W.D. Fluorescent latex microspheres as a retrograde neuronal marker for in vivo and in vitro studies of visual cortex. Nature 310: 498-500 (1984).

2.Katz, L.C. and Iarovici, D.M. Green fluorescent latex microspheres: a new retrograde tracer. Neuroscience 34: 511-520 (1990).