細(xì)胞培養(yǎng)類(lèi)型可以分為貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞兩種，只有極少數(shù)類(lèi)型細(xì)胞同時(shí)存在兩種狀態(tài)模樣。
懸浮細(xì)胞是指不需要依賴(lài)支持物逐步顯現，可在培養(yǎng)基中以懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)的一類(lèi)細(xì)胞，如淋巴細(xì)胞和大部分血液系統(tǒng)來(lái)源細(xì)胞先進技術。（如小鼠白血病細(xì)胞WEHI-3, 人白血病細(xì)胞K-562, HL-60）培訓。工業(yè)上也有越來(lái)越多的貼壁傳代細(xì)胞被馴化出來(lái)，進(jìn)行全懸浮的培養(yǎng)宣講手段。目前在工業(yè)中應(yīng)用的主要有SP2/0重要工具、NS0、CHO配套設備、BHK和HEK293細(xì)胞等更優質，它們主要用于重組蛋白質(zhì)生產(chǎn)；在獸用生物制品中常用的傳代細(xì)胞主要有采用全懸浮培養(yǎng)的BHK21細(xì)胞對外開放、MDCK細(xì)胞實力增強；及借助微載體懸浮培養(yǎng)的Vero細(xì)胞、PK細(xì)胞探索創新、ST細(xì)胞帶來全新智能、 Marc145細(xì)胞等，每種細(xì)胞的特性都不同。
一般情況下去完善，懸浮細(xì)胞相較于貼壁細(xì)胞的處理更加簡(jiǎn)單一些橋梁作用，因?yàn)閼腋〖?xì)胞傳代時(shí)無(wú)須胰酶消化。但這并不意味著懸浮細(xì)胞比貼壁細(xì)胞好養(yǎng)求索，對(duì)新手來(lái)說(shuō)讓人糾結，反而更具挑戰(zhàn)性》€定發展？偸菚?huì)遇到各種各樣的問(wèn)題：比如基石之一，為什么總是出現(xiàn)死細(xì)胞和細(xì)胞分化；說(shuō)好了傳代很easy的增持能力，結(jié)果會(huì)出現(xiàn)分化共同努力；養(yǎng)好了凍存復(fù)蘇后又出現(xiàn)問(wèn)題了！
養(yǎng)好懸浮細(xì)胞追求卓越，有如下大眾經(jīng)驗(yàn)分享逐漸完善。
要點(diǎn)一：足夠的耐心，這是非常必要的
很多懸浮細(xì)胞在剛從凍存狀態(tài)復(fù)蘇時(shí)活力是相對(duì)較差的合理需求，此時(shí)我們需要有足夠的耐心是目前主流，等待細(xì)胞完成自我修復(fù)進(jìn)入對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期。比如THP-1（人單核細(xì)胞白血哺哔|量。慕鈨龅交謴?fù)正常增殖往往需要7-10天的恢復(fù)期充分發揮；Jurkat，Clone E6-1(人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞)復(fù)蘇后也需要5-7天才能恢復(fù)到凍存前的狀態(tài)機構。新手可能會(huì)在此期間放棄培養(yǎng)的特性，所以交流，請(qǐng)多一點(diǎn)耐心哦基礎！培養(yǎng)這類(lèi)細(xì)胞也是培養(yǎng)耐心的過(guò)程呢！
要點(diǎn)二：接種密度的把握
一般來(lái)說(shuō)還不大，懸浮細(xì)胞接種時(shí)密度不應(yīng)低于50萬(wàn)個(gè)/ML高產，很多懸浮細(xì)胞有密度依賴(lài)，密度低導(dǎo)致的不增殖也是新手常見(jiàn)問(wèn)題之一發揮作用。當(dāng)然數據，有極少數(shù)細(xì)胞在密度高時(shí)反而狀態(tài)變差，如W6/32（小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞）發揮。因此顯著，培養(yǎng)不了解的細(xì)胞前查找相關(guān)資料去掌握細(xì)胞特性非常重要。
要點(diǎn)三：換液方法及頻率
換液頻率不應(yīng)該被限制得“明明白白"開放以來，細(xì)胞是活物占，在一個(gè)連續(xù)培養(yǎng)周期內(nèi)，視細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)可分多次添加補(bǔ)充培養(yǎng)基、葡萄糖等特定營(yíng)養(yǎng)成份激發創作，維持細(xì)胞良好的生長(zhǎng)狀態(tài)前景。懸浮培養(yǎng)過(guò)程中，隨著細(xì)胞的增殖增幅最大，原有培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗共享應用，代謝產(chǎn)物的增加，細(xì)胞的活率會(huì)下降標準，及時(shí)補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)示範推廣，使細(xì)胞處于一個(gè)相對(duì)良好的生存環(huán)境。切忌頻繁離心換液即將展開。參考換液方法：
①離心全換液法
即通過(guò)離心（800-1000rpm積極參與，5min）去除全部舊的培養(yǎng)基，更換新鮮培養(yǎng)基培養。該方法適合“皮實(shí)“好養(yǎng)的懸浮細(xì)胞換液(如K562)交流研討，或者當(dāng)前細(xì)胞狀態(tài)良好、密度較高導(dǎo)致培養(yǎng)基消耗較大的情況形式。此方法的優(yōu)點(diǎn)是換液到位建設應用，能去除部分細(xì)胞碎片，但是同樣會(huì)對(duì)細(xì)胞造成一定程度的機(jī)械損傷日漸深入。
②離心半換液法
即通過(guò)離心（800-1000rpm動力，5min）50%細(xì)胞懸液，更換50%體積的新鮮培養(yǎng)基互動式宣講。該方法適合比較“矯情“難養(yǎng)的細(xì)胞（如thp-1）效高性，或者正在調(diào)整狀態(tài)中、密度較低但碎片較多需要去除的情況自動化。
③沉降換液法
即不使用離心機(jī)而是利用重力自然沉降的方法提升，將培養(yǎng)基與細(xì)胞分離，達(dá)到全部或部分更換新鮮培養(yǎng)基意向。但是其有應(yīng)用局限性—只適合能成一定大小細(xì)胞團(tuán)（否則無(wú)法自然沉降意料之外，只能低速離心）的細(xì)胞，尤其是處理依賴(lài)細(xì)胞聚集才能增殖的細(xì)胞時(shí)非常值得推薦形式，如NK-92置之不顧、NK-92 MI、Jurkat數字化。該方法能在換液過(guò)程中最大限度避免離心過(guò)程造成的機(jī)械損傷方便，同時(shí)保留聚集的細(xì)胞團(tuán)，并且去除細(xì)胞碎片也較為干凈各領域。
固定懸浮細(xì)胞應用領域，有如下私房經(jīng)驗(yàn)分享。
養(yǎng)好懸浮細(xì)胞，需要用化合物等試劑刺激懸浮細(xì)胞實現，或者共培養(yǎng)不容忽視。使用免疫熒光來(lái)檢查懸浮細(xì)胞，一直給很多新手服務體系，甚至高手造成心理陰影說服力。如何固定好懸浮細(xì)胞？如何確保不掉片分析？甚至如何讓?xiě)腋〖?xì)胞貼壁來(lái)做實(shí)驗(yàn)表示？是很多實(shí)驗(yàn)者的奢望。懸浮細(xì)胞固定/免疫熒光專(zhuān)用玻片給帶來(lái)解決方案非常激烈。
如下是一些懸浮細(xì)胞固定后做的免疫熒光圖片競爭力所在，可以參考。
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