肝臟是一個(gè)復(fù)雜的器官解決方案,由多種細(xì)胞類型組成。 其中大部分(60-80%)是實(shí)質(zhì)細(xì)胞——肝細(xì)胞處理方法。 其余細(xì)胞形成異質(zhì)的非實(shí)質(zhì)細(xì)胞 (NPC) 群技術節能,主要由肝內(nèi)皮細(xì)胞 (LEC)進行培訓、巨噬細(xì)胞(KF)市場開拓,肝星狀細(xì)胞 (HSC) 和免疫細(xì)胞組成生產製造。 肝內(nèi)免疫細(xì)胞是 NPC 突出的成分(高達(dá) 50%)技術創新,由 T 細(xì)胞(CD8+ 和 CD4+)關鍵技術、B 細(xì)胞保護好、自然殺傷 (NK) 和自然殺傷T (NKT) 細(xì)胞組建、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞 (DC) 和巨噬細(xì)胞的各種亞型組成特點。 肝臟免疫細(xì)胞的相對組成因生理?xiàng)l件和物種而異深刻變革,例如,小鼠肝臟中的 NKT 細(xì)胞比人類多和諧共生。 肝臟免疫細(xì)胞組成不同于淋巴器官或血液質生產力,因?yàn)楦闻K富含 CD4+ T 細(xì)胞、NK技術交流、NKT 和 γ δ (γδ) T 細(xì)胞先進的解決方案。細(xì)胞比例分布參考如下圖。
一般來說創造更多,肝臟主要是致耐受性器官信息,對于預(yù)防對飲食和腸道菌群的炎癥反應(yīng)很重要。 因此大力發展,NPC 積極促進(jìn)免疫耐受豐富內涵,例如,肝細(xì)胞產能提升、枯否細(xì)胞 (KC) 和 LEC 誘導(dǎo) T 細(xì)胞無反應(yīng)適應性。 此外,肝竇LEC (LSEC) 產(chǎn)生稱為 LSECtin 的凝集素通過活化,可觸發(fā) CD8+ T 細(xì)胞耐受落地生根。 此外,KC 分泌抗炎細(xì)胞因子白細(xì)胞介素 10 (IL10) 健康發展,肝臟駐留的 NK 細(xì)胞可通過與免疫檢查點(diǎn)通路的相互作用抑制 T 細(xì)胞有效保障。 在某些病理?xiàng)l件下,例如感染長效機製、炎癥性疾病或癌癥講實踐,肝臟免疫細(xì)胞的分布或功能可能會(huì)發(fā)生變化。 這可能導(dǎo)致潛在的不平衡和免疫細(xì)胞串?dāng)_的改變製高點項目。
為了更好地了解影響肝臟的各種病理為產業發展,需要對常駐/浸潤性免疫群體進(jìn)行分離範圍和領域、免疫表型分析和量化有所增加。 目標(biāo)是獲得高產(chǎn)量的單細(xì)胞懸液,同時(shí)仍保留抗原/表位譜(最小表位降解)并為后續(xù)下游應(yīng)用保留細(xì)胞活力更高要求。為了避免存在于血液中免疫亞群中的肝臟交叉污染越來越重要的位置,肝臟的原位灌注是通過腔靜脈或門靜脈進(jìn)行的。 另一個(gè)關(guān)鍵步驟是正確處理肝組織共同學習。 組織解離可以通過機(jī)械破壞順滑地配合、使用膠原酶的酶消化或兩種方法的組合來進(jìn)行深入。 對于肝臟免疫細(xì)胞表型分析,需要從獲得的勻漿中去除肝細(xì)胞前沿技術,因?yàn)樗鼈兛赡軙?huì)干擾以后的下游免疫分析基礎。 可以通過多個(gè)離心步驟或通過 Percoll 或 Iodixanol 密度梯度進(jìn)一步純化細(xì)胞懸液。 然而多種方式,這個(gè)過程既費(fèi)時(shí)又費(fèi)材料對外開放。 此外,純化方法的苛刻條件也可能影響用于任何下游應(yīng)用的細(xì)胞的活力和/或功能深入交流研討。
小鼠肝臟灌注方案:
(A) 揭開和拉伸門靜脈以進(jìn)行灌注探索創新。 (B) 肝灌注。 (C) 漸進(jìn)式灌注肝臟實現了超越。 (D) 解離的材料準(zhǔn)備新產品。 帶有細(xì)胞培養(yǎng)基的 C 管,含解離肝臟的酶橋梁作用。 (E) 肝臟與解離混合物一起放入 C 管中長遠所需。 (F) 解離后的肝臟勻漿。 (G) 分離組織的濾液拓展應用。 (H) 基于密度梯度的細(xì)胞純化(細(xì)胞懸液頂部的碎片去除溶液層生產創效;離心前)。 (I) 獲得的細(xì)胞被殘留的紅細(xì)胞污染管理。 (J) 去除紅細(xì)胞后的最終NPC優化上下。
小鼠肝臟流式檢測Marker方案:
小鼠肝臟巨噬細(xì)胞清除方案:
LIPOSOMA的ClodronateLiposomes氯膦酸鹽二鈉脂質(zhì)體(貨號:CP-005-005)清除肝臟巨噬細(xì)胞,頻頻見于Cell模樣,Nature和Science生產體系。詳細(xì)文獻(xiàn)可以聯(lián)系靶點(diǎn)科技技術(shù)支持索取全文。清除單核巨噬細(xì)胞是研究巨噬細(xì)胞體內(nèi)功能的重要工具很重要。
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