基于點擊化學的理論講實踐,科研人員開始設計出各種含有這些配對基團的化學分子模塊用于生物分子的動態(tài)示蹤有所應,如:通過追蹤DNA合成狀況來評估細胞增殖能力促進進步。最初,研究人員多采用放射性標記核苷摻入法取得明顯成效,即在DNA合成過程中,摻入氚標記胸腺嘧啶脫氧核苷([3H]thymidine)確定性,合成的DNA也因此具有放射性而被檢測出協同控製。然而,該方法靈敏度低核心技術、檢測耗時長并且具有放射性污染的憂患應用提升,隨后逐漸被基于抗體檢測的BrdU(5’-bromo-2’-deoxyuridine)法所代替。
BrdU法改善了前者靈敏度差創造性、效率低等問題發展的關鍵,但該方法必須通過DNA變性(如酸變性等)來暴露BrdU表位以供BrdU抗體識別。由于步驟繁多規模設備,影響因素較多真諦所在,該方法的重現(xiàn)性比較差。此外競爭力,與其它免疫組化染色一樣充分,BrdU法的染色效果受組織切片大小和抗體滲透性的影響。
Comparison of BrdU and EdU labeling on the detection of DNA synthesis
于是集聚,Timothy J. Mitchison等人想到了將EdU(5-ethynyl-2‘-deoxyuridine)競爭力,產品貨號:1149-100,這種胸苷類似物混進DNA的合成過程中狀況。與胸苷相比機製性梗阻,EdU(5-Ethynyl-2′-deoxyuridine,產品貨號:1149)只是將胸腺嘧啶堿基C5位上甲基替換成端炔基全過程。由于引入的基團足夠小集成應用,不會影響EdU整合到DNA中。此外效果,隨后與EdU端炔基反應的熒光疊氮化物探針也只有抗體分子的500分之一的大小使用,能夠高效穿透組織并直接與新合成的DNA結合,操作簡單之余還會提高示蹤目標的分辨率密度增加、改善實驗操作的可重復性有效性。
Reproducibility of EdU labeling (A) and comparison with BrdU (B) in NIH 3T3 cells
自點擊化學的概念提出以來,該反應在20年間就被引用了上萬次機遇與挑戰,可見其深遠的影響力廣泛關註。諾貝爾獎委員會表示:“點擊化學是一種優(yōu)雅而有效的化學反應服務延伸,現(xiàn)已被廣泛用于藥物開發(fā)、繪制DNA以及創(chuàng)造更符合實際需求的材料具有重要意義。"
名稱:EdU(5-ethynyl-2‘-deoxyuridine)
貨號:1149
品牌:ClickChemistryTools
總代:靶點科技
CAS:61135-33-9
分子量:252.23
結構:如下
隨著點擊化學ClickChemistry的被越來越多的人熟悉和知道進一步,相關應用越來越多。尤其是體內應用點擊化學的案例不斷涌現(xiàn)強大的功能。用不了多久實際需求,點擊化學將在體內研究中百花齊放。ClickChemistryTools提供一站式點擊化學研究工具盒優勢,靶點科技攜手美國ClickChemistryTools為國人在點擊化學研究中添磚加瓦善謀新篇。