2024年8月2日提高，Science Immunology期刊上，來(lái)自比利時(shí)列日大學(xué)的研究人員發(fā)表論文標(biāo)題為“Recruited atypical Ly6G+ macrophages license alveolar regeneration after lung injury"。新發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞群體：Ly6G陽(yáng)性非典型巨噬細(xì)胞更為一致，這是一種重要的先天性免疫細(xì)胞多種場景，在呼吸道病毒造成損傷后會(huì)定植于肺部中提供堅實支撐。這些巨噬細(xì)胞在修復(fù)肺泡方面發(fā)揮著重要作用互動式宣講。這一突破性發(fā)現(xiàn)有望改變我們對(duì)感染后免疫反應(yīng)的認(rèn)識(shí)意見征詢，并為新的再生療法打開大門集中展示。

Ruscitti C等人在2024年7月Sci Immunol.上發(fā)表的文章中培訓，推測(cè)招募的巨噬細(xì)胞的某些亞群可能在組織修復(fù)和再生中發(fā)揮有益作用，將重點(diǎn)放在 IAV 誘導(dǎo)的肺損傷背景下研究先前未描述的表達(dá)Ly6G（一種通常與中性粒細(xì)胞相關(guān)的標(biāo)志物）的巨噬細(xì)胞群宣講手段。

Abstract

The lung is constantly exposed to airborne pathogens and particles that can cause alveolar damage. Hence, appropriate repair responses are essential for gas exchange and life. Here, we deciphered the spatiotemporal trajectory and function of an atypical population of macrophages after lung injury. Post-influenza A virus (IAV) infection, short-lived monocyte-derived Ly6G-expressing macrophages (Ly6G+ Macs) were recruited to the alveoli of lung perilesional areas. Ly6G+ Macs engulfed immune cells, exhibited a high metabolic potential, and clustered with alveolar type 2 epithelial cells (AT2s) in zones of active epithelial regeneration. Ly6G+ Macs were partially dependent on granulocyte-macrophage colony-stimulating factor and interleukin-4 receptor signaling and were essential for AT2-dependent alveolar regeneration. Similar macrophages were recruited in other models of injury and in the airspaces of lungs from patients with suspected pneumonia. This study identifies perilesional alveolar Ly6G+ Macs as a spatially restricted, short-lived macrophage subset promoting epithelial regeneration postinjury, thus representing an attractive therapeutic target for treating lung damage.

材料方法

1重要工具、動(dòng)物模型及樣品制備：

•8-12周齡 C57BL/6 野生型小鼠經(jīng)鼻感染 5pfu 的 IAV H1N1 毒株P(guān)R8/34。•在感染后的不同時(shí)間點(diǎn)（第0配套設備、5更優質、10相對開放、15和20天），收獲肺并處理成單細(xì)胞混懸液脫穎而出。•裂解紅細(xì)胞拓展應用，并通過(guò)70 μm細(xì)胞過(guò)濾器過(guò)濾細(xì)胞。

2結構、流式檢測(cè)的細(xì)胞群體：

•中性粒細(xì)胞 (Ly6G + CD11b + CD64-)•肺泡巨噬細(xì)胞 (Ly6G-CD64 + SiglecF + CD11c +)•單核細(xì)胞（CD64-Ly6C-和CD64-Ly6C +）•炎性單核細(xì)胞 (CD64 + Ly6C +)•間質(zhì)巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞 (F4/80 + CD11b + Ly6G-SiglecF-Ly6C-CD64 +)•Ly6G+ 巨噬細(xì)胞 (Ly6G + CD11b + CD64 +)

3管理、細(xì)胞內(nèi)染色：

•為了檢測(cè)精氨酸酶-1和骨橋蛋白，首先對(duì)細(xì)胞進(jìn)行表面標(biāo)記染色能力建設，然后固定并破膜戰略布局，使用抗精氨酸酶-1和骨橋蛋白的抗體進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)染色。

4表現明顯更佳、增殖試驗(yàn)：

•Ki67 染色：固定細(xì)胞狀態，進(jìn)行破膜處理，并用抗 Ki67 抗體染色以評(píng)估增殖指導。•EdU 摻入：分析前4小時(shí)小鼠注射EdU廣泛認同。處理細(xì)胞進(jìn)行表面染色，然后固定流動性，透化鍛造，并使用基于點(diǎn)擊化學(xué)的檢測(cè)試劑盒進(jìn)行 EdU 染色。

同時(shí)結(jié)合了其它技術(shù)持續創新，包括單細(xì)胞 RNA 測(cè)序逐漸完善、細(xì)胞離心涂片和 Giemsa 染色形態(tài)學(xué)分析以及骨髓嵌合體實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1合理需求、流式細(xì)胞術(shù)分析可發(fā)現(xiàn)IAV感染后髓系細(xì)胞群的時(shí)間動(dòng)態(tài)變化：

•中性粒細(xì)胞在感染后第5天達(dá)到峰值是目前主流，到第15天恢復(fù)至基線水平。•肺泡巨噬細(xì)胞在第5-10天期間數(shù)量部分減少高質量，到第15天時(shí)恢復(fù)充分發揮。•經(jīng)典和炎性單核細(xì)胞約在第5天達(dá)到峰值。•間質(zhì)巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞數(shù)量隨時(shí)間逐漸增加管理。•Ly6G+巨噬細(xì)胞從第5天開始出現(xiàn)設計，第10天達(dá)到峰值，并持續(xù)存在至少到第20天改進措施。

以下是IAV感染后髓系細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化的簡(jiǎn)化圖示：

這個(gè)圖表展示了通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析得到的不同髓系細(xì)胞群的時(shí)間動(dòng)態(tài)變化就此掀開。值得注意的是，Ly6G+巨噬細(xì)胞在恢復(fù)期（第10-20天）出現(xiàn)并持續(xù)存在今年，這一現(xiàn)象暗示它們可能在組織修復(fù)和再生過(guò)程中發(fā)揮重要作用穩步前行。

2、Ly6G+巨噬細(xì)胞的表型特征：

•表達(dá)F4/80高動手能力、SiglecF低逐步改善、CD11c低•高表達(dá)CXCR4意見征詢、MHC-II、CD101和CD319•低表達(dá)中性粒細(xì)胞活化標(biāo)志物CD177

3大大提高、形態(tài)學(xué)特征的必然要求，通過(guò)離心涂片和吉姆薩染色觀察，Ly6G+巨噬細(xì)胞呈現(xiàn)以下特點(diǎn)：

•腎形細(xì)胞核（類似炎性單核細(xì)胞）•細(xì)胞質(zhì)中含有大量空泡狀結(jié)構(gòu)•細(xì)胞膜富含突起

4產品和服務、轉(zhuǎn)錄組特征應用擴展，單細(xì)胞RNA測(cè)序識(shí)別出一個(gè)不同的Ly6G+巨噬細(xì)胞群，其特征是高表達(dá)：

•組織蛋白酶（Ctsb增多、Ctsz）•半乳糖凝集素（Lgals1活動上、Lgals3）•精氨酸酶-1（Arg1）•骨橋蛋白（Spp1）

5、來(lái)源和增殖特性：

•EdU摻入實(shí)驗(yàn)和Ki67染色表明Ly6G+巨噬細(xì)胞不處于活躍增殖狀態(tài)共享應用。•使用Ms4a3CreR26LSLtdTomato和Cx3cr1GFP報(bào)告基因小鼠進(jìn)行的譜系追蹤實(shí)驗(yàn)顯示，Ly6G+巨噬細(xì)胞源自募集的單核細(xì)胞標準，而非局部祖細(xì)胞示範推廣。

6、發(fā)育軌跡：

•對(duì)單細(xì)胞RNA測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行Slingshot軌跡分析表明即將展開，Ly6G+巨噬細(xì)胞是由Ly6C+單核細(xì)胞經(jīng)過(guò)中間炎性單核細(xì)胞階段分化而來(lái)大幅增加。

7、功能意義：Ly6G+巨噬細(xì)胞在促進(jìn)肺損傷后的肺泡再生中發(fā)揮重要作用傳承。