1.將兩個已解剖分離的脾臟共同學習，置于一個15 mL離心管頂部配備的70 μm細胞篩網上投入力度。使用無菌注射器的柱塞方案，以溫和力度將脾組織壓碎以通過細胞篩網進行勻漿處理各領域，確保不破壞細胞結構。在整個過程中不斷豐富，分次使用總計6 -10mL的含10%胎牛血清（FBS）的RPMI 1640培養(yǎng)基實施體系，逐步沖洗篩網以收集細胞組建。2.將收集到的細胞懸液以500 × g離心5分鐘，隨后效果較好，小心地去除上清液重要的意義，并將細胞沉淀重懸于5 mL的紅細胞裂解緩沖液中，在室溫下靜置孵育5分鐘等多個領域。孵育結束后再獲，迅速加入10 mL磷酸鹽緩沖溶液（PBS）以終止紅裂過程，再次以500 × g離心5分鐘應用擴展。若沉淀中仍有殘留紅細胞擴大，需重復上述裂解和洗滌步驟，直至肉眼所見無紅色發揮效力。3.細胞計數與活力檢測：完成裂解后新格局，以500 × g離心5分鐘，丟棄上清液安全鏈，然后將細胞沉淀用1 mL PBS重新懸浮顯示。接下來，采用臺盼藍排除法鑒別活細胞真正做到，在血細胞計數板上進行精確的細胞計數科普活動，以確定活細胞的數量。這種方法基于臺盼藍無法穿透活細胞膜而能夠染色死細胞的原理強化意識，從而區(qū)分出活細胞和死細胞的比例及總數充足。4. 通過流式檢測抗體標記的脾臟細胞。尤其需要注意一點的積極性，對于脾臟巨噬細胞的流式檢測，在抗體標記前至關重要，需要Fc受體的封閉不久前，避免非特異染色。5. 大家拿到自己的流式結果后提升行動，如果實驗結果不符合自己的預期能力建設。這時最需要做的就是質控自己的流式數據，比如細胞的分群研究進展，大概比例無障礙，細胞的死活，細胞的數量快速融入，分群是不是集中認為，一定要找文獻，無論如何增強，對照組的正常小鼠重要意義，這個數據是可以參考的交流等。如果自己的流式數據對著文獻都不太符合常規(guī)，就不要給給實驗下結論規劃。這時提高，基礎的實驗體系就有問題。
6. 對于巨噬細胞適應性，CD11b和F4/80雙標堅實基礎，肝臟和脾臟，還有腹腔重要作用，肯定會有三群（根據這兩個maker的表達高低）等地。對于很多用荷蘭liposoma品牌的巨噬細胞清除劑clodronateliposomes氯膦酸二鈉脂質體的客戶來說，清除組和對照組完成的事情，也可以參考這個圖物聯與互聯。
