Pimonidazole是新型的組織細胞缺氧標記物,Hypoxyprobe(HPI)公司擁有硝基咪唑類化合物特異性抗體逐漸完善,該抗體為公司專有技術(shù)迎難而上,在此基礎(chǔ)上Hypoxyprobe公司開發(fā)了不同標記的特異性抗體自動化方案,可用于:利用免疫組織化學振奮起來,酶聯(lián)免疫吸附試驗和流式細胞儀技術(shù)分析對腫瘤細胞分析檢測講理論。
Pimonidazole使用注意事項
1. Animal Studies 動物研究
研究正冲懺?;蚰[瘤組織缺氧首先通過靜脈注射(intravenous infusion)非常激烈、腹腔注射(intraperitoneal injection)或口服(oral ingestion)法給Hypoxyprobe-1溶液前景,劑量為60mg/kg體重進一步意見。比如,25g小鼠的探針用量為1.5mg/只小鼠共享應用。(高達400mg/kg的劑量用于小鼠無可見毒性或引起組織缺氧變化生產能力,但60mg/kg以成本給予良好的染色結(jié)果)。
給藥后示範推廣,Hypoxyprobe-1分布到包括大腦的所有組織堅持好,且僅僅在氧濃度≤14μM(相當于pO2=10mm Hg,37℃)的細胞內(nèi)與蛋白質(zhì)巰基形成加合物大幅增加。除了腫瘤之外特性,正常組織如肝臟、腎臟和皮膚含pO2等于或低于10mm Hg的細胞等特點,也會結(jié)合Hypoxyprobe-1建言直達。
2.Tissue cultures 組織培養(yǎng)
通常情況下,細胞懸液置于含100-200μM Hypoxyprobe-1的缺氧環(huán)境中孵育1-2h將進一步。之后細胞離心涂片充分發揮、固定、FTIC-MAb1和anti-FITC chromogenic secondary染色提升行動。
常見問題解答(FAO)
1.Hypoxyprobe-1 探針如何溶解能力建設?
Pimonidazole HCl 是弱堿性鹽酸鹽,水溶性非常好研究進展,一般建議溶解于116mg/ml 的中性生理鹽水無障礙。
2.Pimonidazole HCl劑量是多少?
對于常規(guī)的小動物大小比較均一的互動互補,例如:小鼠或大鼠發揮重要帶動作用,我們推薦:探針用量:60 mg/kg意向。從30 mg/kg 到 400 mg/kg在小鼠和大鼠都有用到,在此范圍內(nèi)的探針用量文化價值,不會由于血流效應(yīng)而導致毒性或氧量的改變形式。對于體型較大個體,注射劑量依據(jù)個體的基礎(chǔ)表面積而定不斷完善。對于人樣本數字化,推薦劑量為:0.5 mg/m2,狗樣本:0.28 mg/m2
3.Pimonidazole HCl 探針是否能夠滲透進入低氧大腦組織或腦腫瘤組織基礎上?
Pimonidazole HCl可以自由滲透進入腦和腦腫瘤組織各領域。
4.探針注射后,多久可以進行收獲組織保持競爭優勢?
對于人體組織的一些研究表明進行培訓,收獲組織需要在免疫后15-24小時后檢查。探針在血漿中的半衰期是5小時長效機製,因此16-24小時相當于3-5個探針半衰期循環(huán)法治力量。也就是說:在組織檢查時:大概有1/8 到1/32 的探針仍存在,冷固定后分享,這樣減少了非特異性染色共享,且低背景。
另外關(guān)于人類腫瘤研究表明方式之一,活組織檢查應(yīng)該在免疫后生動,1.5-4小時,然后組織及時轉(zhuǎn)到液氮固定創新能力。這種方法背景也較低新品技。小鼠血漿中的探針半衰期在0.25小時。這種情況下發展需要,采取1-2小時收獲組織然后采取快速固定方法攻堅克難,可有效的消除背景。
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