巨噬細胞是造血系統(tǒng)中*可塑性的細胞更多可能性，存在于所有組織中去創新，具有豐富的功能多樣性。巨噬細胞參與細胞碎片和病原體的識別緊迫性、吞噬和降解結構，并且在向T細胞提呈抗原以及誘導其他抗原呈遞細胞表達共刺激分子等方面發(fā)揮作用，從而啟動適應性免疫反應高效。

除此之外溝通協調，巨噬細胞還在維持組織穩(wěn)態(tài)以及組織的修復和重塑方面發(fā)揮作用。當遇到不同的抗原刺激時體系，單核細胞會變成高度殺傷性的巨噬細胞（M1）保障性，或變成免疫抑制性的巨噬細胞（M2）。

實驗前準備

一、THP-1細胞的極化

1) THP-1細胞鋪板堅定不移，將佛波酯PMA（100 ng/ml）加入*培養(yǎng)基中組合運用，誘導其向巨噬細胞的成熟更讓我明白了；

2) 48小時后THP-1細胞成熟為巨噬細胞，外觀圓形高折光積極，從懸浮狀態(tài)快速變成貼壁狀態(tài)充分；

3) 將成熟的巨噬細胞消化下來（Accutase酶消化：專門用于消化貼壁細胞），重新鋪板集聚，誘導向M1-like競爭力、M2-like的極化。

4) 與IFN-γ(20 ng/ml)和LPS(100 ng/ml)孵育48小時以上狀況，使其向M1極化機製性梗阻。

與IL-4(20 ng/ml)和IL-13(20 ng/ml)孵育48小時以上，使其向M2極化全過程。

5) 極化完成后集成應用，細胞用不含刺激物的無血清RPMI重懸，可保持72小時不負眾望。

二高效流通、單核細胞來源巨噬MDM

1) 將單核細胞以5×105/ml的濃度接種在含有10%胎牛血清、100 U/ml青霉素和100 μg/ml鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基中精準調控，同時加入20 nM的CSF-1功能。

2) 單個核細胞在37°C、5% CO2條件下培養(yǎng)7天解決，每3天更換一次培養(yǎng)液預期，獲得MDM。

3) MDM得到之后幅度，去除原培養(yǎng)基結構，更換新的培養(yǎng)基。

4) 若與新鮮的貢獻、無血清的RPMI繼續(xù)培養(yǎng)規模最大，則維持M0狀態(tài)。

5) 與LPS(1 μg/ml)和IFN-γ(10 ng/ml)孵育48小時明確了方向，則向M1極化系統性。

與IL-4(20 ng/ml)和IL-13(5 ng/ml)孵育48小時，則向M2表型極化增產。

6) 極化完成后便利性，細胞用不含刺激物的無血清RPMI重懸，可保持72小時行動力。

三提供有力支撐、骨髓來源巨噬細胞BMDM

1) 將分離的骨髓細胞以2×106/ml的濃度接種在含有10%胎牛血清、100 U/ml青霉素和100 μg/ml鏈霉素的IMDM培養(yǎng)基中保供，同時加入10 ng/ml M-CSF自行開發。

2) 在第3天更換新鮮的BMDM生長培養(yǎng)基進行部署。

3) 第7天，熒光團偶聯(lián)抗體染色應用情況，用流式細胞術檢測表達CD11b和F4/80的細胞來評估成熟BMDM的形成保護好。

4) 第7天，成熟BMDM的形成后改為新鮮刺激培養(yǎng)基表現。

5) 與100 ng/ml LPS或含有50 ng/ml IFNγ的100 ng/ml LPS共孵育特點，則向M1極化。

與10 ng/ml IL-4和/或10 ng/ml IL-13共孵育結論，則向M2極化和諧共生。

6) 用0.05%的胰蛋白酶將受刺激的細胞從培養(yǎng)皿中分離出來，然后用含有10%胎牛血清的PBS洗滌細胞兩次適應性強。

四技術交流、RAW264.7細胞極化

1) 將RAW264.7細胞重懸在含有10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中拓展。

2) 將傳至2-5代的細胞作為后續(xù)實驗使用創造更多。

3) 并將培養(yǎng)基換成不含胎牛血清的*培養(yǎng)基。

4) 與100 ng/ml LPS共孵育不斷進步，則向M1極化工藝技術。

與20 ng/ml IL-4（可添加20 ng/ml IL-10）共孵育，則向M2極化更加廣闊。

下表為對以上4種細胞誘導試劑進行的簡要匯總

參考文獻：

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